世界初の顕微鏡システムである mIRage-LS を使用して、蛍光と同時ラマン分光法を統合したサブ 500 nm O-PTIR を体験してください。
- 蛍光顕微鏡とサブミクロン分解能の O-PTIR 分光法を一緒に配置
- 細胞、組織、細菌の高速蛍光識別とイメージング
mIRage-LSについて
mIRage-LS サブ 500nm O-PTIR プラットフォームは、同じ場所に設置された O-PTIR と蛍光顕微鏡を統合することにより、ライフ サイエンスの研究を変革します。
蛍光顕微鏡法は分子の特異性を提供し、振動分光法 (IR およびラマン) は巨大分子の空間的に詳細な特性評価を可能にします。これらの方法論を組み合わせることで、研究者は比類のない精度で生物学的標本を検査できるようになります。
mIRage-LS サブ 500 nm O-PTIR 分解能と同時ラマン分光法および同時設置蛍光の統合により、500 nm 未満のスケールでの相関イメージングが可能になります。
この統合された登録不要のシステムは、これらの技術を組み合わせて、分子に関する深い洞察を得る経路を提供し、どちらの技術の単独の適用では達成できなかった画期的な発見を促進します。
画像クレジット: Photothermal Spectroscopy Corp
細胞の同じ場所にある蛍光とサブミクロンの IR
神経膠腫細胞は、タンパク質ストレス顆粒を識別するために G3BP1、核については DAPI、脂質を検出するために BODIPY を使用して標識されました。
RBG は広視野落射蛍光画像を重ね合わせたもので、赤色はタンパク質ストレス顆粒、青色は核、緑色は脂質を示しています。四角いマーカーは、O-PTIR スペクトル収集の位置を示します。画像クレジット: Photothermal Spectroscopy Corp
右側の画像は明視野像を示しています。四角いインジケーターは、O-PTIR スペクトルが収集された領域を表します。
O-PTIR スペクトルは、左側と中央のペインに表示されたマーカー位置から数秒以内に収集されました。目的の細胞内特性に合わせて、明確なスペクトルの変動を特定できます。特に、タンパク質ストレス顆粒のアミド I バンドにわずかな変化があり、他の位置と比較してタンパク質の二次構造が変化している可能性があることを示唆しています。
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mIRage-LS アプリケーション
組織および細胞のイメージング
- 単一細胞: 正常/疾患細胞の分化、薬剤と細胞の相互作用、細胞内 (脂肪滴) イメージング研究
- 組織: 細胞の型別、石灰化、病状、コラーゲンの方向
- 細菌: 単一細胞レベルでの細菌の同定、安定同位体標識による細胞代謝の研究 (13C、 15N、重水素）
画像クレジット: Photothermal Spectroscopy Corp
mIRage-LS は、同じ場所にある蛍光を使用して O-PTIR 測定の位置を特定します
アルツハイマー病のマウスモデルの脳組織の切片を、アミロイド凝集体を強調するために Amytracker 630 で、タンパク質を示すために AF488 で、核をマークするために DAPI で染色しました。
下の図は、染色標本の明視野画像を示しています。右上隅には RBG 複合蛍光画像があり、アミロイド凝集領域が赤/オレンジで強調表示されています。蛍光画像でマークされた特定のアミロイド凝集体は、明視野画像では簡単に識別できないことは注目に値します。
以下に示すのは、蛍光画像に示されたライン プロファイルから導出された平均 O-PTIR スペクトルです。スペクトルは、凝集体の存在下 (青) と非存在下 (赤) の両方で平均されました。
凝集体の平均スペクトルは、アミド I バンド内の顕著な変動を明らかにし、タンパク質のベータシート構成の特徴である 1631 cm-1 の顕著な特徴を強調しています。
これは、明視野顕微鏡では容易に観察できないアミロイド凝集領域の特定の側面を、分子組成データを提供できるサブミクロンO-PTIR分光法と並行して蛍光イメージングを統合することの利点を明確に示しています。
この例では、タンパク質の二次構造に特に応答しており、これは IR 分光法に関連する注目すべき強みです。
画像クレジット: Photothermal Spectroscopy Corp
